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Centre intégré universitaire de santé
et de services sociaux de l'Est-de-l'Île-de-Montréal

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Recherche

Cytométrie en flux

La cytométrie en flux est une technique d’analyse des caractéristiques physiques et fonctionnelles de chaque cellule au sein d’une suspension cellulaire. Ainsi, on peut évaluer les proportions de différentes sous-populations cellulaires présentes dans le milieu a très grande vitesse (plusieurs milliers de cellules par seconde). Cette technique permet une mesure précise et rapide de paramètres tels que la taille des cellules, leur nature, leur contenu en ADN ainsi que la présence de molécules spécifiques à leur surface, intracellulaires ou intranucléaires. Ces molécules sont détectées à l’aide de sondes fluorescentes qui sont excitées par des lasers. Les membres de notre équipe fournissent une formation approfondie aux utilisateurs, les accompagnant à chaque étape, de la conception de leurs panels de fluorochromes à l'analyse des résultats, en passant par l'optimisation des étapes clés de leur expérience.

Les équipements

Notre plateforme est équipée d'instruments de cytométrie spectrale et conventionnelle à la fine pointe de la technologie permettant ainsi de réponde aux exigences variées de la recherche en santé. Nous disposons de cinq analyseurs et de deux trieurs, disponibles tant en interne qu'en externe. Tous nos équipements font l'objet d'un entretien régulier, de calibrages et d'évaluations de performance pour garantir la fiabilité et la reproductibilité des données.

Nos trieurs de cellules ARIA III et Cytek sont munis d'une hotte à pression négative permettant le tri d'échantillons potentiellement infectieux, y compris les cellules humaines provenant de donneurs sains. Cependant, l'approbation du comité de biosécurité est requise pour tout échantillon provenant de primates ou de cellules génétiquement modifiées non fixées.

Notre mission

Entretenir, Calibrer, évaluer la performance des instruments pour assurer l’obtention de résultats reproductibles tant au niveau de l’analyse que du tri cellulaire.

Former les usagers pour leur permettre d’atteindre leurs objectifs tant au niveau expérimental que théorique sur tous les sujets en rapport avec la cytométrie en flux (design expérimental, design de panel, acquisition, analyse, etc...

Clientèle

  • Laboratoire de recherche académique (CR-HMR et autres plateformes externes)
  • Industries

Services offerts

Grace à nos appareils à spectre complet nous pouvons trier et analyser jusqu’à 40 paramètres fluorescents différents en plus d’extraire l’autofluorescence des échantillons garantissant ainsi l'obtention d’une résolution inégalée.

Analyse multiparamétrique (liste non exhaustive)

  • Immunophénotypage
  • Cycle cellulaire, quantification de l’ADN et prolifération
  • Étude des espèces réactives de l'oxygène
  • Viabilité et mort cellulaire
  • Évaluation de la cytotoxicité d’une drogue ou d’un type cellulaire
  • Flux calcique
  • PH intracellulaire
  • Potentiel de la membrane cytoplasmique et mitochondriale
  • Phagocytose et autophagie
  • Autres

Tri cellulaire à haut débit en condition aseptique

  • NC2+
  • 1 à 6 populations simultanées en tubes, plaques ou sur lames
  • Cellules uniques
  • Jusqu’à 40 paramètres fluorescents

Formation et soutien

  • Acquisition sur les appareils BD Biosciences
  • Acquisition sur les appareils Cytek
  • Formations théoriques et ou pratiques personnalisables allant de la création d'expérience impliquant la cytométrie en flux à l'analyse des résultats

Station d'analyse

  • Équipée d'un MacBook Pro (16 pouces) 96 GB ram
  • De deux grands écrans (>32 pouces)
  • D'une souris sans fil
  • D'un adapteur pour câble internet
  • D'un adapteur pour prise USB-C/USB-A

Équipement

Trieurs

Cytek Aurora CS

Le Cytek Aurora est équipé de 5 lasers qui permettent la détection de 40 paramètres de fluorescence en plus des paramètres de taille (FSC) sur le laser bleu et de structure (SSC) sur les lasers bleu et violet. Cet instrument permet également d’extraire l’auto-fluorescence des cellules ce qui permet d’obtenir une meilleure résolution des signaux.

  • 305 nm Ultra-Violet : 16 détecteurs de fluorescence
  • 405 nm violet : 16 détecteurs de fluorescence en plus du SSC-B
  • 488 nm bleu : 14 détecteurs en plus du SSC-A
  • 561 nm jaune-vert : 10 détecteurs de fluorescence
  • 640 nm rouge : 8 détecteurs de fluorescence

Nous utilisons des buses de différentes tailles (70, 100 et 130 µm) et des pressions différentielles variées selon le type de cellules à trier. Il est possible de trier 6 populations simultanément en tubes, en plus de faire le tri en plaque.

Configuration Trieur Cytek Aurora PDF

BD ARIA III

Le BD ARIA III est équipé de 4 lasers qui permettent la détection de 16 paramètres de fluorescence en plus des paramètres de taille (FSC) et de structure (SSC).

  • 407 nm violet : 6 détecteurs de fluorescence
  • 488 nm bleu : 3 détecteurs (SSC et 2 détecteurs de fluorescence)
  • 561 nm jaune-vert : 5 détecteurs de fluorescence
  • 633 nm rouge : 3 détecteurs de fluorescence

On utilise des buses de différentes tailles (70, 85 et 100 µm) et des pressions différentielles variées selon le type de cellules à trier. Il est possible de trier 4 populations simultanément, en plus de faire le tri en plaque.

Configuration Trieur BD ARIA III PDF

Analyseurs

Cytek Aurora

Le Cytek Aurora est équipé de 5 lasers qui permettent la détection de 40 paramètres de fluorescence en plus des paramètres de taille (FSC) sur le laser bleu et de structure (SSC) sur les lasers bleu et violet. Cet instrument permet également d’extraire l’auto-fluorescence des cellules ce qui permet d’obtenir une meilleure résolution des signaux.

  • 305 nm Ultra-Violet : 16 détecteurs de fluorescence
  • 405 nm violet : 16 détecteurs de fluorescence en plus du SSC-B
  • 488 nm bleu : 14 détecteurs en plus du SSC-A
  • 561 nm jaune-vert : 10 détecteurs de fluorescence
  • 640 nm rouge : 8 détecteurs de fluorescence

Configuration Cytek Aurora PDF

2 BDLSRFortessa X-20

Les 2 BD LSRFortessa X-20 sont équipés de 5 lasers qui permettent la détection de 16 paramètres de fluorescence en plus des paramètres de taille (FSC) et de structure (SSC). L’un d’entre eux est équipé d’un lecteur de plaque HTS.

  • 355 nm Ultra-Violet : 3 détecteurs de fluorescence
  • 405 nm violet : 6 détecteurs de fluorescence
  • 488 nm bleu : 3 détecteurs (SSC et 2 détecteurs de fluorescence)
  • 561 nm jaune-vert : 4 détecteurs de fluorescence
  • 633 nm rouge : 3 détecteurs de fluorescence

Configuration 2 BDLSRFortessa X-20 PDF

BD FACSCelesta

Le BD FACSCelesta est équipé de 3 lasers qui permettent la détection de 12 paramètres de fluorescence en plus des paramètres de taille (FSC) et de structure (SSC).

  • 405 nm violet : 5 détecteurs de fluorescence
  • 488 nm bleu : 5 détecteurs (SSC et 4 détecteurs de fluorescence)
  • 633 nm rouge : 3 détecteurs de fluorescence

Il est également possible de changer les filtres et les miroirs sur cet instrument, afin de détecter différentes combinaisons de fluorochromes.

Configuration BD FACSCelesta PDF

BD LSRII

Le BD LSR II est équipé de 4 lasers qui permettent la détection de 10 paramètres de fluorescence en plus des paramètres de taille (FSC) et de structure (SSC).

  • 355 nm Ultra-Violet : 2 détecteurs de fluorescence
  • 407 nm violet : 2 détecteurs de fluorescence
  • 488 nm bleu : 5 détecteurs (SSC et 4 détecteurs de fluorescence)
  • 633 nm rouge : 2 détecteurs de fluorescence

Il est également possible de changer les filtres et les miroirs sur cet instrument, afin de détecter différentes combinaisons de fluorochromes.

Configuration BD LSRII PDF

Définitions

CR-HMR: Centre de recherche de l’Hôpital Maisonneuve-Rosemont.

Utilisateur : Toute personne utilisant les instruments de la plateforme de cytométrie du CR-HMR

  • Utilisateur interne: Étudiant ou employé du CR-HMR
  • Utilisateur externe: Étudiant ou employé affiliés à un centre de recherche autre que le CR-HMR ainsi que les membres d’une industrie

Responsables

Frédéric Duval, PhD
Anne-Marie Aubin, M.Sc.
cytometrie.crhmr.cemtl@ssss.gouv.qc.ca
514-252-3400 poste 3521