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Cytométrie en flux

La cytométrie en flux est une technique d’analyse des caractéristiques physiques et fonctionnelles de chaque cellule au sein d’une suspension cellulaire. Ainsi, on peut évaluer les proportions de différentes sous-populations cellulaires présentes dans le milieu. Dans un temps très court, elle mesure une grande quantité de cellules avec des paramètres tels que la taille des cellules, leur contenu en ADN ainsi que la présence de molécules spécifiques à leur surface, intracellulaires ou intranucléaires. Ces molécules sont détectées à l’aide de sondes fluorescentes et de lasers.

Aujourd’hui, les nouvelles générations d’appareils possèdent jusqu’à 7 lasers qui permettent de mesurer plus de 30 variables différentes. Certains appareils trient les cellules en fonction de ces paramètres et les isolent en sous-populations cellulaires pour les soumettre ensuite à d’autres analyses ou les mettre en culture pour étudier leurs fonctions.

Des formations individuelles pour chacun des systèmes sont accessibles sur rendez-vous. Le trieur de cellules ARIA III est équipé d’une hotte à pression négative permettant le tri d’échantillons potentiellement infectieux dont les cellules humaines de donneurs sains.

Équipement

BD LSRFortessa X-20

  • Le BD LSRFortessa X-20 est équipé de 4 lasers qui permettent la détection de 16 paramètres de fluorescence en plus des paramètres de taille (FSC) et de structure (SSC).

    • 407 nm violet : 6 détecteurs de fluorescence
    • 488 nm bleu : 3 détecteurs (SSC et 2 détecteurs de fluorescence)
    • 561 nm jaune-vert : 5 détecteurs de fluorescence
    • 633 nm rouge : 3 détecteurs de fluorescence

BD LSR II

  • Le BD LSR II est équipé de 4 lasers qui permettent la détection de 10 paramètres de fluorescence en plus des paramètres de taille (FSC) et de structure (SSC).

    • 488 nm bleu : 5 détecteurs (SSC et 4 détecteurs de fluorescence)
    • 633 nm rouge : 2 détecteurs de fluorescence
    • 407 nm violet : 2 détecteurs de fluorescence
    • 355 nm UV : 2 détecteurs de fluorescence

    Il est également possible de changer les filtres et les miroirs sur cet instrument, afin de détecter différentes combinaisons de fluorochromes.

BD FACSCanto

  • Le CANTO A est équipé de 2 lasers qui permettent la détection de 6 paramètres de fluorescence en plus des paramètres de taille (FSC) et de structure (SSC).

    • 488 nm : 5 détecteurs (SSC et 4 détecteurs de fluorescence)
    • 633 nm : 2 détecteurs de fluorescence

2 BD FACSCalibur

  • Les Caliburs sont équipés d’un laser bleu et d’une diode rouge permettant la détection de 4 paramètres de fluorescence en plus des paramètres de taille (FSC) et de structure (SSC).

    • 488 nm : 4 détecteurs (SSC et 3 détecteurs de fluorescence)
    • 633 nm : 1 détecteur de fluorescence

Trieur BD ARIA III

  • Le BD ARIA III est équipé de 4 lasers qui permettent la détection de 16 paramètres de fluorescence en plus des paramètres de tailles (FSC) et de structure (SSC).

    • 407 nm Violet : 6 détecteurs de fluorescence
    • 488 nm Blue : 3 détecteurs (SSC et 2 détecteurs de fluorescence)
    • 561 nm Yellow-Green : 5 détecteurs de fluorescence
    • 633 nm Red : 3 détecteurs de fluorescence

    On utilise des buses de différentes tailles (70, 85 et 100 µm) et des pressions différentielles variées selon le type de cellules à trier. Il est possible de trier 4 populations simultanément, en plus de faire le tri en plaque.

Trieur SONY SH800

  • Le trieur SONY est équipé de deux lasers colinéaires (488 nm et 561 nm) qui permettent la détection de 6 paramètres de fluorescence en plus des paramètres de taille (BSC) et de structure (SSC).

    Des « chips » de 70, et 100 µm peuvent être utilisés et la pression peut être modifiée selon le type de cellules à trier. Le SONY permet le tri de 2 populations simultanément et le tri en plaque.

    Logiciels
    La plateforme de cytométrie met à la disposition des chercheurs, les logiciels BD CellQuest Pro, BD FACSDiVa, BD FCAP Array, Modfit (Verity Software), FlowJo, FlowLogic et Cytobank.

Responsable

Martine Dupuis, M.Sc.
514-252-3400 poste 3521